T/LNSI 008-2024 现行

主要技术内容:5 技术要求5.1 原材料和辅料5.1.1 应符合 T/CSCB 0001-2022 要求。5.1.2 应建立供者细胞采集的供者评估与筛选标准、采集方法、运输标准和交接标准，保证供者和细胞的安全。5.1.3 供体应筛查 HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV 和 TP，并记录结果。5.2 分离与培养方法5.2.1 分离及提取采用组织块贴壁法从脐带华氏胶组织中分离培养脐带间充质干细胞。进行人脐带间充质干细胞原代培养。5.2.2 人脐带间充质干细胞换液根据细胞的生长情况换液。5.2.3 人脐带间充质干细胞传代传代操作应密度适宜、及时、迅速。5.2.4 人脐带间充质干细胞冻存冻存细胞程序降温后置液氮中保存。5.2.5 人脐带间充质干细胞复苏取出冻存管进行快速融化，离心洗涤后进行培养。5.2.6 人脐带间充质干细胞溶液人脐带间充质干细胞溶液为均质状态，无絮状沉淀，细胞存活率≥90％。5.3 关键质量属性5.3.1 细胞形态细胞贴壁培养时呈纺锤形和梭形的成纤维细胞态，形态均一。5.3.2 染色体核型正常核型应为 46,XX 或 46,XY 且 400-550 条段阶段未见染色体异常。5.3.3 细胞存活率未冻存细胞存活率≥90%且冻存复苏后细胞存活率≥70%。5.3.4 细胞标志蛋白CD105、CD73、CD90 阳性率均≥95%；CD11b、CD19、CD31、CD34、CD45、HLA-DR 阳性率≤2%。5.3.5 三系分化具有成骨、成脂、成软骨的分化潜能。5.3.6 成瘤性免疫缺陷动物（如小鼠）体内成瘤试验结果为阴性。5.3.7 微生物真菌、细菌、支原体、HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV、TP 为阴性。5.3.8 干细胞对淋巴细胞增殖抑制应满足下列要求：——共培养组与阳性对照组相比，白介素 6、肿瘤坏死因子α表达下调，白介素 10 表达上调；——共培养组与阳性对照组相比，淋巴细胞增殖被显著抑制；——共培养组与阳性对照组相比，淋巴细胞亚群辅助性 T 细胞上调，细胞毒性 T 淋巴细胞下调。5.4 过程控制5.4.1 扩增、冻存、复苏等过程控制应符合 T/CSCB 0001-2022 要求。5.4.2 细胞 STR 检测结果应与供体细胞保持一致