T/CSBM 0046-2024 涂层抗凝血性能体外试验方法

适用范围

范围:本文件规定了涂层抗凝血性能体外试验的总则、试验方法和报告。 本文件适用于通过强结合力均匀固定在材料或器械表面的抗凝涂层。 本文件不适用于能从表面快速洗脱或释放的涂层; 主要技术内容:5 试验方法蛋白质吸附测试5.1.1 概述当血液与医疗器械接触时，器械表面会迅速的吸附上纤维蛋白原等血浆蛋白，吸附的血浆蛋白会进一步造成血小板的大量黏附，最终导致凝血的形成。因此，评估吸附在器械表面血浆蛋白的吸附情况，可作为判断涂层抗凝性能的重要指标。5.1.2 方法一5.1.2.1 原理通过ELISA间接法，样品表面吸附一定量的纤维蛋白原（Fg）作为抗原，将吸附Fg的样品先与特异性的纤维蛋白原抗体结合，然后加入酶标记的二抗形成复合物，最后通过底物反应产生显色信号来检测样品上吸附的Fg的含量。5.1.2.2 试验步骤样品在以pH 7.4的缓冲液配置的Fg溶液中浸泡吸附1 h～4 h后，取出样品轻轻洗去表面未牢固吸附的Fg，置于容器中依次加入纤维蛋白原抗体和带有酶标记的二抗进行结合，然后加入显色剂和终止液，测试反应液在最大吸收波长下的吸光度值，通过与无涂层的同种材料样品比较，间接反映有无涂层样品对Fg吸附量的差异。注：制备体积较大或较厚的涂层材料时，宜尽量减少切割面的暴露，且使Fg蛋白溶液完全覆盖试验样品。5.1.3 方法二5.1.3.1 原理在碱性环境下，蛋白质分子中肽键与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。二喹啉甲酸（BCA）特异地与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 ?处的吸光度与纤维蛋白原（Fg）浓度呈线性关系，通过建立Fg浓度--吸光度标准曲线，可计算样品表面吸附的蛋白质浓度。5.1.3.2 试验步骤5.1.3.2.1 将 Fg 用 pH 7.4 的缓冲液配置成不同浓度的标准溶液，参照 BCA 蛋白浓度测定试剂盒的要求加入配置好的 BCA 工作液，37 ℃孵育 30 min 后，立即在 562 ?处测试吸光度值，以 Fg 浓度为横坐标，吸光度为纵坐标制作标准曲线，采用线性方程进行拟合。5.1.3.2.2 样品在 Fg-PBS 溶液浸泡吸附 1 h～4 h 后，取出样品轻轻洗去表面未牢固吸附的 Fg，置于容器中加入 BCA 工作液，37 ℃孵育 30 min 后，立即读取反应液吸光度值，带入标准曲线，计算得到蛋白浓度。通过与无涂层的同种材料样品比较，反映有无

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