GB/T 15797-1995
被代替
T/YNANT 08-2024
现行
团体标准
T/YNANT 08-2024 禽流感病毒H5、H7、H9亚型多重实时荧光定量RT-qPCR检测方法
T/YNANT 08-2024 The Multi-target Real-Time Quantitative RT-qPCR Detection Method for Avian Influenza Virus H5, H7, and H9 Subtypes
价格:
$ 20.00
基本信息
标准编号:
T/YNANT 08-2024
标准类型:
团体标准
标准状态:
现行
is_force_gb:
no
中国标准分类名称:
-
国际标准分类名称:
兽医学
发布日期:
2024-02-06
实施日期:
2024-02-16
归口单位:
云南省实用新技术协会
适用范围
范围:本文件规定了禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）H5、H7、H9亚型多重实时荧光定量RT-qPCR检测的试剂与材料、仪器与设备、实验前准备、操作步骤、结果判定等内容。 本文件适用于家禽及野禽的组织、鸡胚尿囊液、排泄物、分泌物及环境样品中禽流感病毒M基因、H5、H7、H9亚型的核酸检测; 主要技术内容:根据禽流感病毒共有基因特定的序列，合成一对特异性引物和一条特异性的荧光双标记探针。探针的5＇端和3＇端分别标记不同的荧光素，如5＇端标记 FAM 荧光素，它发出的荧光能够被检测仪器接收，称为报告荧光基团(用 R 表示)，3＇端一般标记 TAMRA 荧光素，它在近距离内能吸收5＇端报告荧光基团发出的荧光信号，称为淬灭荧光基团（用Q表示）。当 PCR 反应在退火阶段时，一对引物和一条探针同时与目的基因片段结合，此时探针上R基团发出的荧光信号被Q基团所吸收，仪器检测不到R所发出的荧光信号；当PCR反应进行到延伸阶段时，Taq酶在引物的引导下，以四种核苷酸为底物，根据碱基配对的原则，沿着模板链合成新链；当链的延伸进行到探面结合部位时，受到探针的阻碍而无法继续，此时的Taq酶将探针水解成单核昔酸，消除阻碍，与此同时标记在探针上的R基团游离出来被检测仪所接收；在Taq酶的作用下继续延伸过程合成完整的新链，R和Q基团均游离于溶液中，仪器可继续检测到R所发出的荧光信号
研制信息
起草单位:
云南省畜牧兽医科学院、云南省动物疫病预防控制中心、广东省农业科学院动物卫生研究所、云南农业大学动物医学院
起草人:
信爱国、元正菊、李珂、段博芳、孙敏华、向斌、常志顺、陈丽英、赵蓉、严红亚