T/SYJ 0003-2023 黑木耳固体菌种制作技术规程

适用范围

主要技术内容:5技术要求接种须无菌操作，避免杂菌污染。定期检查菌种培养期间要定期检查培养菌种的培养箱温度和湿度；检查培养器皿的棉塞、盖子和培养基有无生霉现象，如发现异常则立即取出该管重新纯化，经培养后补上空缺；在低倍解剖镜下抽样检查有无螨虫等害虫，发现时须及时消除。6方法与步骤菌种通常被分为3级。1级种也叫母种或试管种。可用组织分离法或孢子分离法获得母种。2级种也叫原种，是利用母种的菌丝体接入木屑培养基中所产生的菌种。3级种也叫栽培种，是利用原种再扩繁一次所产生的菌种，它直接用于生产，因此也叫生产种。经过母种—原种—栽培种的不断扩大繁殖后，菌丝体的数量越来越多，越来越强壮，利用这样的菌丝体投入生产就可以生长出优良的子实体。母种生产6.1.1母种培养基制备采用PDA加富培养基制作母种培养基，配方：土豆200g、葡萄糖20g、琼脂20g、KH2PO41.5～2g、MgSO40.5～1g、10g蛋白胨、水1000mL。配制方法：将200g马铃薯去皮，去芽眼，切成小条放入铝锅中，加入1000mL水，同时放入20g棉籽壳，煮沸20-30分钟左右至马铃薯酥而不烂时，用6-8层纱布过滤，取滤汁于锅中，加入葡萄糖20g、KH2PO41.5～2g、MgSO40.5～1g、10g蛋白胨、补水至1000mL，加入琼脂熔化，趁热分装于试管中，试管使用直径2厘米，长度20厘米的最优。配制好的培养基用漏斗分装至试管，试管口、壁不粘培养基，塞橡胶塞或棉塞。每7支捆成一捆，管口用牛皮纸包好，直立于灭菌锅内，121℃、0.11～0.15MPa下灭菌30min，待培养基冷却至60～70℃，将其摆成斜面，斜面长度最好占管长的2/3左右比较合适，冷却备用。6.1.2菌种分离与转管培养菌种分离方法有孢子分离法、组织分离法、菌丝体分离法。孢子分离法是选用当年生无杂菌污染的鲜耳片，以黑、厚、大为佳，经无菌水冲洗几次，用丝线将耳片腹面向下吊挂，另一端吊挂在装有培养基的三角瓶口部，加棉塞封口，在25～28℃温箱中接收孢子并培养成菌丝体。组织分离法是选用优质耳片，表面用75%酒精棉球擦拭2～3遍，用酒精棉包住耳片约2分钟，剪取远离耳基没有筋的 部位约0.2平方厘米。在无菌条件下，接入试管斜面培养基上，经25～28℃左右的温度培养长出菌丝体。菌丝体分离法是从黑木耳的段木中分离菌丝体获得菌种的方法。切取火柴头大小

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